树突状细胞（Dendritic cells,DC）是机体功能最强的抗原递呈细胞,能够高效摄取抗原，然后进行加工和递呈，不成熟DC具有较强的捕获抗原能力，成熟DC能够有效的激活T细胞，启动细胞免疫。
工具/原料
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1640培养基，PBS,胎牛血清，细胞因子
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培养皿，吸管,离心机，CO2培养箱
方法/步骤
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1
从医院或者红十字会血液中心取得献血者的白细胞浓缩液。
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2
无菌条件下，将血袋内的血液转移至50ml无菌离心管中，2000g离心15min。离心结束，血液分为三层：从上往下：血浆、PBMCs、和红细胞层；PBMCs细胞层作为离心样品。
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3
用3ml吸管吸去上层的血浆，再吸出乳白色的PBMCs至50 ml离心管中，将白色层的PBMCs（4-7 ml）吸至50 ml离心管中，可以尽量少吸红细胞，等体积加入室温预热的PBS溶液；
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4
取一个50ml离心管，加入室温预热（或37℃）的7ml Ficoll-Paque (Amersham，1.077g/ml)，再将样品1沿管壁小心加入至Ficoll溶液上方，800g离心30min（离心机的升速度调节为5，降速度调至0），离心结束后，50ml离心管依次分为四层：血浆、PBMCs、Ficoll层和红细胞层
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5
小心将上层血浆吸去或直接吸取PBMCs细胞，在将PBMCs细胞吸至15ml无菌血清管中，加入至12ml 的PBS清洗细胞，200g离心5min，重复2-3次。
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6
得到PBMCs细胞后，加入2-3倍体积的RPMI-1640培养基重悬细胞，计数，并留取 1×106 个细胞进行HLA-A2型别鉴定
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7
计数取5×105个细胞铺12孔板 (根据实验要求确定需要的12孔板数目)， 培养基RPMI1640含有10% FBS，37℃，5.0% CO2，培养1小时。剩余细胞按2×107cells/ml，冻存于液氮罐中
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8
铺满细胞的12孔板在37℃，5.0% CO2，培养1小时后取出，吸出非贴壁细胞，收集于离心管，收集的细胞为PBLs，离心后冻存于液氮罐中
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9
用预热的PBS清洗12孔板底部的贴壁细胞，吸去余下悬浮的细胞，轻轻洗细胞，重复5次；向贴壁的细胞加入800U/ml 的h GM-CSF，（37℃，5.0% CO2）培养至第2天，每孔吸去一半培养基，再加入等体积的室温新鲜培养基，含有100 ng/mL GM-CSF和40 ng/mL IL-4
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10
隔天半量换液，同时补加细胞因子。第6天加50ng/mL TNF-α，继续培养两天即为成熟DC
END
注意事项
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分离细胞时离心机的升降速度要调到最小
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吸取中间层淋巴细胞时要避免吸到红细胞
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注意无菌操作
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