如何进行叶绿素含量测定（用丙酮法）

［实验原理］在叶绿素a和b的吸收光谱曲线中，红波波长范围内，叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b的最大吸收峰在645nm。吸收曲线彼此又有重叠，叶绿素a、b在D652nm的吸收峰相交，两者有相同的比吸收系数（均为34.5），也可以在此波长下测定一次（D652）而求出叶绿素a、b总量：

CT=(D652×1000)/34.5    

根据Lambert—Beer定律，最大吸收峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与光密度OD之间有如下关系：

OD1＝Ca·ka1+Cb·kb1        (1)

OD2＝Ca·ka2+Cb·kb2        (2)

Ca为组分a的浓度（g/L）  Cb为组分b的浓度（g/L）

OD1为在波长λ1（即组分a的最大吸收峰波长）时，混合液的光密度OD值。

OD2为在波长λ2（即组分b的最大吸收缝波长）时，混合液的光密度OD值。

ka1，kb1，ka2，kb2分别为组分a，b的比吸收系数，即组分a（b）的浓度为（1g/L）时，其在相应波长（λ1，λ2）时的光密度OD值。

叶绿素A和B的80%丙酮溶液，当浓度为1时，比吸收系数K值如下表：

波长/nm

叶绿素a

叶绿素b

663

82.04

9.27

645

16.75

45.60

将表中数值代入上式（1），（2）并整理的：

Ca=0.01272OD663-0.00259OD645

Cb=0.02288OD645-0.00467OD663

若把Ca，Cb的浓度单位从原来的g/L改为mg/L，则上式可改写为下列形式：

Ca=12.72OD663-2.59OD645       (3)     Cb=22.88OD645-4.67OD663         (4)

Ct=Ca+Cb=8.05OD663+20.29OD645    (5)

Ct为叶绿素总浓度，单位为g/L。

利用（3），（4），（5）式即可计算出叶绿素A和B及总叶绿素的浓度（g/L）。

［器材与试剂］

实验仪器：高级型分光光度计，离心机，台天平，剪刀，研钵，漏斗，移液管

实验试剂：丙酮，碳酸钙      实验材料：植物叶片

［实验步骤］

1.取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎块，称取0.1G放入研钵中加80%丙酮少量，少许碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆，再加80%丙酮，将匀浆转入离心管，并用适量80%丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，用80%丙酮定容至10ml。离心。（室温下于暗处浸提）

2.取浸提液，用722型可见光分光光度计比色，测定663nm、645nm、652nm波长处的吸光值，用80%的丙酮做参比。按公式计算叶绿素a、叶绿素b，并计算得出叶绿素总含量（a+b）。

［实验结果］叶绿素a含量(mg/g)=(12.72A663-2.59A645)*Vs/1000w

                  叶绿素b含量(mg/g)=(22.88A645-4.67A663)*Vs/1000w

                   Vs：提取液总体积（ml)